16705

بررسي پادتن تك تيره با استفاده از روش‌هاي كروماتوگرافي پروتئين A، SE-HPLC و SDS-PAGE

1404

دكتر شهرزاد جوانشير

چكيده پادتن‌هاي تك‌تيره (mAbs) به عنوان عوامل درماني و تشخيصي مهم، نيازمند ارزيابي دقيق از نظر خلوص، يكپارچگي ساختاري و پايداري هستند. در اين مطالعه، سه روش تحليلي مكمل - كروماتوگرافي پروتئين A، كروماتوگرافي اندازه‌اي با كارايي بالا (SE-HPLC) و الكتروفورز ژل پلي‌آكريل آميد (SDS-PAGE) براي بررسي جامع پادتن تك‌تيره به كار گرفته شد. كروماتوگرافي پروتئين A با استفاده از اتصال اختصاصي به ناحيه Fc آنتي‌بادي، امكان تخليص آن را با خلوص اوليه بالاي 98٪ از محيط كشت پيچيده سلولي فراهم كرد. اين مرحله پايه‌اي براي آناليزهاي بعدي بود. سپس SE-HPLC براي تجزيه و تحليل كمي نمونه تخليص‌شده به كار رفت و وجود اشكال مختلف مولكولي را بررسي كرد. نتايج، حضور قالب مونومر آنتي‌بادي را با درصدي بالاتر از 97٪ و مقادير كمتر از 2٪ تجمع (عمدتاً دايمر) را نشان داد. در نهايت، SDS-PAGE در شرايط كاهنده و غيركاهنده براي تأييد كيفي خلوص و يكپارچگي ساختاري استفاده شد. در شرايط غيركاهنده، يك باند اصلي متناظر با آنتي‌بادي كامل مشاهده شد و در شرايط كاهنده، دو باند مجزاي مربوط به زنجيره سنگين و سبك بدون حضور باندهاي اضافي معنادار نمايان گرديد. تركيب اين سه روش، رويكردي قدرتمند براي ارزيابي جامع پادتن‌هاي تك‌تيره ارائه مي‌دهد كه مي‌تواند در كنترل كيفيت و توسعه فرآيند توليد اين فرآورده‌هاي زيستي ارزشمند به كار رود. نتايج اين مطالعه بر كارايي اين روش‌ها در تأييد هويت، خلوص و يكنواختي محصول نهايي تأكيد دارد. واژه هاي كليدي: پادتن تك‌تيره، كروماتوگرافي پروتئين A، تخليص آنتي‌بادي، بررسي خلوص ، اشكال مولكولي

10/7/2025 12:00:00 AM

89299

1404/10/20