10480

10480

استفاده از روش مايسل معكوس براي استخراج و خالص سازي مخلوط آنزيمي

كارشناسي ارشد

شيمي - بيوتكنولوژي

مهرماه 1390

مهرماه 1390

دكتر پريسا حجازي

آنزيمها كاتاليزورهاي زيستي مي¬باشند كه سرعت واكنش را در دما و فشار پايين افزايش مي-دهند. كاربردهاي خاص آنزيمها در صنايع مختلفي همچون دارويي و غذايي باعث شده است تا درصد خلوص آنها مورد توجه قرار گيرد. در اين پژوهش به منظور خالص¬سازي آنزيم اندوپلي-گالاكتروناز از مخلوط آنزيمها، از روش استخراج مايع-مايع با استفاده از سيستم مايسل معكوس استفاده شد. انتخاب پذيري و بازده بالا، قابليت استفاده در عمليات پيوسته، هزينه¬هاي نسبتاً پائين و انجام پذيري آن در دو مرحله سريعِ پيشرو و پسرو از مزاياي اين روش استخراج است. سيستم مايسل معكوس بكار رفته شامل سورفكتانت كاتيوني ستيل تري متيل آمونيوم برومايد (CTAB) در مخلوط حلال ايزواكتان، هگزانول و بوتانول مي¬باشد. در جداسازي آنزيم اندوپلي-گالاكتروناز از مخلوط آنزيمي، فاكتورهاي موثر با استفاده از روش يك فاكتور در يك زمان بر روي بازده كل استخراج و بازيافت فعاليت آن مورد بررسي قرار گرفت. شرايط بهينه استخراج پيشرو، زمان=30 دقيقه، 5=pH، غلظت NaCl، سورفكتانت كاتيوني CTAB و آنزيم به ترتيب 1/0 مولار، 100ميلي مولار و ppm 500 بدست آمد. تحت اين شرايط، بازده كل استخراج 7/30% و بازيافت فعاليت1/57% حاصل شد. با تعيين مقادير بهينه در آزمايشهاي يك فاكتور در يك زمان، از روش فاكتوريل كامل با 3 فاكتور در 2 سطح با 4 نقطه مركزي جهت بدست آوردن فاكتورهاي موثر و همچنين برهمكنشهاي آنها استفاده شد. در بدست آوردن ميزان بيشينه همزمان دو پاسخ بازده كل استخراج و بازيافت فعاليت بوسيله نرم¬افزار در 4=pH، غلظت نمك و سورفكتانت M04/0 و mM230، ميزان بازده كل استخراج %2/32 و بازيافت فعاليت %9/52 بدست آمد. واژه‌هاي كليدي: استخراج مايسل معكوس، آنزيم اندوپلي¬گالاكتروناز، سورفكتانت كاتيوني (CTAB)