14397

14397

مطالعه تجربي جداسازي آميلاز به روش استخراج ميسل معكوس

كارشناسي ارشد

بيوتكنولوژي

اسفند ماه 1393

اسفند ماه 1393

دكتر پريسا حجازي

شيمي

چكيده آنزيم¬ها كاتاليزورهاي پروتئيني هستند كه سرعت واكنش¬ها را افزايش مي¬دهند، به همين منظور در فرايندهاي صنعتي به طور گسترده مورد استفاده قرار مي¬گيرند. به دليل كاربرد وسيع آنزيم¬ها در صنايع مختلف، فرايند جداسازي آنها اهميت ويژه¬اي پيدا مي¬كند. آنزيم آلفا آميلاز، يكي از آنزيم¬هاي پركاربرد مي¬باشد كه در اين پژوهش براي استخراج آن از روش استخراج ميسل معكوس استفاده شد. براي انجام فرايند استخراج از سيستم¬هاي سورفكتانت آنيوني بيس (2-اتيل هگزيل) سولفوسوكسينات سديم (AOT)/ ايزواكتان و سورفكتانت كاتيوني ستيل تري متيل آمونيوم بروميد (CTAB)/ايزواكتان/ ان بوتانول/ ان هگزانول استفاده شد. استخراج ميسل معكوس شامل دو مرحله جلوگرد و عقبگرد مي¬باشد كه در مرحله جلوگرد آنزيم از فاز آبي وارد هسته ميسل معكوس شده و در مرحله عقبگرد از ميسل معكوس وارد فاز آبي جديد مي¬شود. اثر فاكتورهاي موثر بر هر دو فرايند جلوگرد و عقبگرد به طور همزمان بر بازده فرايند جلوگرد، عقبگرد و بازده فعاليت با طراحي آزمايش يك فاكتور در يك زمان بررسي شد. نتايج اين آزمايش¬ها نشان داد سورفكتانت AOT براي استخراج آلفا آميلاز مناسب نمي¬باشد. در بررسي اثر فاكتورهاي موثر فرايند جلوگرد و عقبگرد با استفاده از سورفكتانت CTAB، بيشترين بازده استخراج جلوگرد، عقبگرد و بازده فعاليت در pH و غلظت نمك فاز آبي جلوگرد به ترتيب 7 و M1/0، غلظت سورفكتانت mM50، درصد حجمي هگزانول 10% و pH فاز آبي عقبگرد 5 (غلظت نمك فاز آبي فرايند عقبگرد ثابت در نظر گرفته شد) به دست آمد. با استفاده از محدوده موثر تعيين شده، اثر فاكتورهاي موثر بر فرايند عقبگرد از جمله pH فاز آبي عقبگرد و درصد حجمي هگزانول با هدف افزايش فعاليت آنزيمي و همچنين بررسي تداخل آنها با استفاده از طراحي آزمايش فاكتوريل كلي مورد بررسي قرار گرفت. معيار تعيين نقطه بهينه، بيشترين مقدار بازده جلوگرد، بازده عقبگرد و بازده فعاليت در نظر گرفته شد. با اين هدف در pH=6 فاز آبي عاري¬ساز و درصد حجمي هگزانول 10% بازده استخراج جلوگرد، عقبگرد و بازده فعاليت به ترتيب 9/92%، 56/81% و 8/79% حاصل شد. واژه‌هاي كليدي: آنزيم آلفا آميلاز، استخراج ميسل معكوس، سورفكتانت AOT، سورفكتانت CTAB، طراحي آزمايش