21408

21408

بررسي تجربي فرآيند پگيليشن اينترفرون بتا 1آ

كارشناسي ارشد

طراحي فرآيند

1395

1398/07/29

دكتر اميد وحيدي

دكتر د اريوش عابدي

مهندسي شيمي

داروهاي بيولوژيك ويا زيست‌داروها داروهايي هستند كه از منابع زيستي گرفته شده باشند. واكسن، خون و فراورده‌هاي آن، ياخته‌هاي سوماتيك، آلرژن‌ها، بافت‌هاي زيستي و پروتئين‌هاي نوتركيب‌كننده شناخته‌شده‌ترين انواع زيست‌داروها به شمار مي‌روند. تا به امروز، بيوتكنولوژي بيش از 400 نوع دارو و واكسن جديد توليد نموده است كه حدود 200 نوع بيماري از جمله انواع مختلف سرطان¬ها و بيماري هاي آلزايمر، بيماري¬هاي قلبي، ديابت، بيماري MS، ايدز و آرتريت را مورد هدف قرار مي‌دهند. اينترفرون¬هاي انساني، گليكوپروتئين (پروتئينهايي متصل به مولكولهاي قند) هستند و امروزه اعتقاد بر اين است كه در كنترل انواع عفونت¬هاي ويروسي، از جمله سرماخوردگي نقش دارند. اين اينترفرون¬ها، پتانسيل¬ كنترل سرطان را نيز دارند، اما توليد بسيار اندك اين تركيبات همواره مانعي در برابر شناخت وسعت كارايي آنها بوده است. پگيليشن معمولاً يك مرحله اضافي در انتهاي فرآيند توليد يك پروتئين مي باشد. هدف پگيليشن افزايش اندازه پروتئين و جلوگيري از خروج آن از بدن از طريق كليه مي باشد كه مجدداً پروتئين به جريان خون بيمار بازگشته و طي زمان بيشتر پروتئين طي فرآيند هيدروليز از PEG جدا شده و جذب بدن گردد. اين فرآيند باعث كاهش تعداد دوزهاي تزريق بيمار و نهايتاً رضايت بيمار مي گردد. در اين پايان نامه فعالسازي PEG جهت پگيليشن داروي اينترفرون بتا 1 آ و همچنين جداسازي داروي اينترفرون بتا 1 آ از آلبومين و درنهايت اتصال PEG فعال به اينترفرون بتا 1 آ بصورت تجربي در آزمايشگاه شركت بيوسان فارمد بررسي گرديده است. در طي اين آزمايش ابتدا اينترفرون بتا 1 آ فرموله شده از آلبومين جدا سازي شده و طي سه مرحله m-PEG به پگ آلدهيد تبديل گشته است. پس از آن دو ماده با حرارت دهي ملايم طي 20 ساعت واكنش داده و پيوند كووالانسي بين پگ آلدهيد و اينترفرون بتا 1 آ تشكيل گرديده است. پس از آن طي اولترافيلتراسيون پگ و اينترفرون هاي واكنش نداده جداسازي گرديده و پگ اينترفرون بتا 1 آ نيز جمع آوري گرديد. تست NMR جهت بررسي تشكيل پگ آلدهيد، تست SDS-PAGE جهت بررسي كيفيت پروتئين و بررسي جرم مولي پروتئين قبل و بعد از پگيليشن، تست مالدي تاف جهت بررسي وزن مولكولي پروتئين قبل و بعد از پگيليشن، تست با دستگاه CD و فلورسنت جهت بررسي تغييرات ساختار پروتئين و مقايسه قبل و بعد از پگيليشن و بررسي با كيت سنجش بردفورد جهت غلظت پروتئين واكنش نداده كه براساس آن راندمان كار 74 درصد تعيين گرديد.

1398/09/11

Experimental study of pegylation process of interferon beta 1a

10/21/2019 12:00:00 AM

Biological drugs or biopharmaceuticals are made biological sources such as microorganisms. Vaccines, blood products, somatic cells, allergens and recombinant proteins are the most widely recognized types of biopharmaceutical products. Biotechnology has produced more than 400 drugs for about 200 types of diseases, such as cancers and Alzheimer's, heart disease, diabetes, MS and AIDS. Human interferons are glycoproteins and are believed to be involved in the control of various viral infections. Very low production of interferon has always been a limitation. PEGylation is usually an extra step at the end of the process of producing a protein. Purpose of PEGylation is to increase the size of the protein and prevent it from exiting the body through the kidneys. This process reduces the number of injection and ultimately the patient's satisfaction. In this thesis, PEG activation for PEGylation of interferon beta 1a and purification of interferon beta 1a from albumin and finally binding of activated PEG to interferon beta 1a have been investigated experimentally in Biosun Pharmed laboratory. During this experiment, interferon beta 1a separated from albumin, PEG aldehyde produced from m-PEG in three steps and finally these two products were then reacted with moderate heating for 20 hours. At the end unreacted interferons and PEG were separated by ultrafiltration and PEGylated interferon beta 1a was also collected. The efficiency of the process was determined by the Bradford protein assay about 74%.